Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9546

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)

英文名稱：Caspase 3 Inhibitor Ac-DEVD-CHO

產(chǎn)品規(guī)格：10mM×0.1ml|5mg

貨號(hào)：FS-X9546

產(chǎn)品介紹:

本品是一種非常強(qiáng)的Caspase 3抑制劑，可以抑制由Caspase3激活導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡。也可以抑制Caspase 7。本品是一種可逆的Caspase 3抑制劑，也是常用的細(xì)胞凋亡抑制劑之一，常用于觀察特定的細(xì)胞凋亡是否通過Caspase 3激活來介導(dǎo)。可以用于抑制培養(yǎng)細(xì)胞內(nèi)的Caspase 3，也可用于抑制體外純化或粗抽提的Caspase 3。在體外對Casapse 3的IC50＝200pM。本品10mM包裝產(chǎn)品配制在DMSO中，可以直接使用。5mg包裝為粉末裝。

分子式：C20H30N4O1

分子量：502.5

純度：＞95%。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

踝蛋白(talin)elisa檢測試劑盒英文名稱：talin ELISA Kit，talin，

過氧化物mei體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)elisa檢測試劑盒英文名稱：PPAR-γ ELISA Kit，PPAR-γ，

糖鏈抗原19-9(CA19-9)elisa檢測試劑盒英文名稱：CA19-9 ELISA Kit，CA19-9，

水通道蛋白3(AQP-3)elisa檢測試劑盒英文名稱：AQP-3 ELISA Kit，AQP-3，

羧化不全骨鈣su(ucOC)elisa檢測試劑盒英文名稱：ucOC ELISA Kit，ucOC，

生長激su(HGH)elisa檢測試劑盒英文名稱：HGH ELISA Kit，HGH，

神經(jīng)穿透su1(NPTX-1)elisa檢測試劑盒英文名稱：NPTX-1 ELISA Kit，NPTX-1，

溶血補(bǔ)體(Hc)elisa檢測試劑盒英文名稱：Hc ELISA Kit，Hc，

去jia(NA)elisa檢測試劑盒英文名稱：NA ELISA Kit，NA，

前列腺suE2(PGE2)elisa檢測試劑盒英文名稱：PGE2 ELISA Kit，PGE2，

皮動(dòng)蛋白(CTTN)elisa檢測試劑盒英文名稱：CTTN ELISA Kit，CTTN，

尿激mei型纖溶mei原激活因子(uPA)elisa檢測試劑盒英文名稱：uPA ELISA Kit，uPA，

腦紅蛋白(NGB)elisa檢測試劑盒英文名稱：NGB ELISA Kit，NGB，

脂蛋白磷脂meiA2(Lp-PL-A2)elisa檢測試劑盒英文名稱：Lp-PL-A2 ELISA Kit，Lp-PL-A2，

異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)elisa檢測試劑盒英文名稱：hnRNP P2 ELISA Kit，hnRNP P2，

載脂蛋白A1(apo-A1)elisa檢測試劑盒英文名稱：apo-A1 ELISA Kit，apo-A1，

胰島su原(PI)elisa檢測試劑盒英文名稱：PI ELISA Kit，PI，
Caspase 3抑制劑(Ac-DEVD-CHO)糖suan莫mi松標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Mometasone Furoate

諾普利標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Lisinopril

阿奇霉su標(biāo)準(zhǔn)品(定性用) 規(guī)格:75mg 英文名稱：Azithromycin Identity

維生suB2標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Riboflavin (Vitamin B2)

鹽suan西替利嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Cetirizine Hydrochloride

碘代對ben二酚標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Iodoquinol

β-谷固chunβ-谷固chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:300mg 英文名稱：Beta-Sitosterol

jia潑尼龍標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Methylprednisolone

降糖靈標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Phenformin Hydrochloride

左旋異腎上腺su標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Levonordefrin
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)