PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9607

產(chǎn)品介紹：

PCNA 細(xì)胞增殖檢測試劑盒（細(xì)胞免疫熒光法/流式細(xì)胞儀檢測），PCNA是細(xì)胞DNA 多聚酶的“δ"輔助蛋白，是真核細(xì)胞DNA 合成時所必需的一種酸性核蛋白。PCNA 在細(xì)胞核內(nèi)合成，并儲存在核內(nèi)，細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)時，其含量很低，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)入增殖周期中，其表達(dá)明顯增加，故PCNA 的表達(dá)高低可反映細(xì)胞增殖的活躍程度。

操作方法

1. 在適的環(huán)境下培養(yǎng)細(xì)胞。

2. 除去培養(yǎng)液，用PBS 洗一次。

3. 胰蛋白處理和收集細(xì)胞，離心，（注意1）保證每管細(xì)胞數(shù)在106 個。

4. 用0.3 ml PBS 輕輕的重懸細(xì)胞, 然后慢慢加入0.7 ml 預(yù)冷的100%乙醇。用1 ml 玻璃移液管小心的混勻。在4°C 至少1h。（注意2）

5. 沉淀細(xì)胞，*吸去上清。

6. 用150 μl PBS/1 % BSA 洗細(xì)胞2 次。

7. 用100μl 抗體孵育液（0.5% Tween-20/1%BSA/PBS）重懸細(xì)胞，加入1ul PCNA 抗體(1μg/106 cells)，室溫孵育1 小時。

8. 離心收集細(xì)胞，用150μl1% BSA-PBS 洗2 次。

9. 離心收集細(xì)胞，用50μl 抗體孵育液重懸，加1μl (1.5μg/106 cells) 羊抗鼠IgG-FITC，室溫孵育30 分鐘。離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次。

10. 用含有終濃度為10 μg/ml RNase A 和20μg/ml PI 的0.5 ml PBS（pH7.4）重懸細(xì)胞。

11. 避光使細(xì)胞在室溫下孵育20min 后，離心收集細(xì)胞，150μl PBS/ 1 % BSA 洗2 次后，轉(zhuǎn)移至流式檢測管中重懸。

12. FACS 檢測或者儲存于4℃。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱	英文名稱	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號
PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)	PCNA cell proliferation Detection Kit	20T	FS-X9607

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開蓋時試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導(dǎo)致錯誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會增加空白吸收，從而影響檢測結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性，則測定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據(jù)細(xì)胞的類型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對于大多數(shù)情況孵育 1 小時即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長時間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時間有所不同。

③顯微鏡下觀察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時間過長，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

肌特異性烯chun化mei(MSE)elisa檢測試劑盒英文名稱：MSE ELISA Kit，MSE，

饑餓su(GHRL)elisa檢測試劑盒英文名稱：GHRL ELISA Kit，GHRL，

黑su皮質(zhì)激su5受體(MC5R)elisa檢測試劑盒英文名稱：MC5R ELISA Kit，MC5R，

核糖核suanmeiA8(RNASE8)elisa檢測試劑盒英文名稱：RNASE8 ELISA Kit，RNASE8，

含溴區(qū)PHD指蛋白1(BRPF1)elisa檢測試劑盒英文名稱：BRPF1 ELISA Kit，BRPF1，

過氧化還原mei1(PRDX1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PRDX1 ELISA Kit，PRDX1，

骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)elisa檢測試劑盒英文名稱：BMPR1A ELISA Kit，BMPR1A，

孤菲肽原(PNOC)elisa檢測試劑盒英文名稱：PNOC ELISA Kit，PNOC，

干擾suα8(IFNα8)elisa檢測試劑盒英文名稱：IFNα8 ELISA Kit，IFNα8，

帕金森氏病蛋白2(PARK2)elisa檢測試劑盒英文名稱：PARK2 ELISA Kit，PARK2，

腦多巴an神經(jīng)營養(yǎng)因子(CDNF)elisa檢測試劑盒英文名稱：CDNF ELISA Kit，CDNF，

鳥suan環(huán)化mei激活因子2A(GUCA2A)elisa檢測試劑盒英文名稱：GUCA2A ELISA Kit，GUCA2A，

膜聯(lián)蛋白A13(ANXA13)elisa檢測試劑盒英文名稱：ANXA13 ELISA Kit，ANXA13，

硫suan皮膚su差向異構(gòu)mei(DSE)elisa檢測試劑盒英文名稱：DSE ELISA Kit，DSE，

磷suan烯chun式suan羧激mei1(PCK1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PCK1 ELISA Kit，PCK1，

亮氨suan豐富重復(fù)激mei2(LRRK2)elisa檢測試劑盒英文名稱：LRRK2 ELISA Kit，LRRK2，

酪蛋白α(CSN1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CSN1 ELISA Kit，CSN1，
PCNA細(xì)胞增殖檢測試劑盒(ICF/FACS法)美托爾相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

烯雌酚標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Diethylstilbestrol

醋suan去氧皮質(zhì)tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Desoxycorticosterone Acetate

L-絲氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：L-Serine

L-丙氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：L-Alanine

甘氨suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Glycine

酒石suan美托爾標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Metoprolol Tartrate

鹽suanfu西汀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Fluoxetine Hydrochloride

海索比妥標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Hexobarbital CIII

曲松鈉E-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Ceftriaxone Sodium E-Isomer

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