參數規(guī)格：
產品名稱：轉基因玉米品系98140核酸檢測試劑盒
產品規(guī)格：48T   0.1PCR管
產品貨號：FS-P10733
產品分類：熒光探針法
產品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產品特點：
本產品就是根據保守區(qū)設計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實驗過程：
一、試劑準備
1. DNA模板
2．對應目的基因的特異引物（在PCR反應中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據你的模板鏈設計。因此，擴增不同的基因需要設計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：
1）Ct值的重現性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數時，剛剛進入真正的指數擴增期（對數期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數存在線性關系，可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確，重現性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標記）。擴增后用內切酶消化PCR產物，競爭性模板的產物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產物分開，分別測定熒光強度，根據已知模板推測未知模板的起始拷貝數。
b、內參照法
在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物，內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記，下游引物不標記。在模板擴增的同時，內標也被擴增。在PCR產物中，由于內標與靶模板的長度不同，二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內標為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物，擴增產物被固相板上特異的探針所結合，再加入抗di高辛或生物素酶標抗體－辣根過氧化物酶結合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內標，作出標準曲線，也可實現定量檢測目的。
 -1517℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

刺孢小克銀漢霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

 ATCC20888producesomega-3fattyacids模式菌株: no種屬: Schizochytrium sp.estuarinewater,California安全等級: 1培養(yǎng)基: 72生長條件: 20.0°C

結核分枝桿菌生長條件: 37℃研究提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no 真空冷凍干燥法

芽孢桿菌屬產果膠酶模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 37℃

裂褶菌代謝產物模式菌株: no子實體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 25

 IFFI3118腐乳菌模式菌株: no種屬: Actinomucor repens Schostakowisch提供形式: 凍干粉安全等級: 1培養(yǎng)基: 綜合PDA：20%馬鈴薯汁1L，葡萄糖20g ，KH2PO4 3g， MgSO4.7H2O 1.5g，硫胺素微量，瓊脂 15g，pH 自然。生長條件: 28-30℃，好氧

 -1518℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

瑞典假絲酵母培養(yǎng)基: 33模式菌株: no淤泥提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法;其他

擬青霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

平菇分類學研究，栽培農藝性狀研究模式菌株: no朽木提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 25℃

 ivcas7.00937培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no種屬: Bacillus│thuringiensis提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28-32℃ 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

貴州節(jié)叢孢培養(yǎng)基: 18模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ -80℃冰箱凍結法；礦物油法；定期移植法

產黑假交替單胞菌微生物/耐冷菌模式菌株: no水樣/海水提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 20℃

 -1519℃冰箱凍結；真空冷凍干燥

蘇云金芽孢桿菌松躅亞種生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法

靛藍E2F2  轉錄因子E2F-2抗原ULBP2/N2DL2  UL16結合蛋白2抗體

黃柏酮E2F4  轉錄因子E2F-4抗原ULBP1/N2DL1  UL16結合蛋白1蛋白抗體

吳茱萸堿E2F6  轉錄因子E2F-6抗原UHRF1  核蛋白95抗體

吳茱萸次堿E2 tag  E2 tag多肽抗原UGT2B4  尿苷二磷葡萄糖轉移酶2B4抗體

松脂二葡萄糖苷EAAT3(Excitatory amino acid transporters 3)  膠質谷氨運載蛋白3抗原UGT1A9  尿苷二磷葡萄糖轉移酶1A9

2,3,5,4-四羥基二乙烯葡萄糖苷EBNA-3 (Epstein barr nuclear antigens 3)  EB病編碼核蛋白-3UGP2  尿苷酰二磷葡萄糖焦磷化酶2抗體

貝母素甲ECE1(Endothelin Converting Enzyme 1)  內皮素轉化酶1抗原UGDH/UDPGDH  尿苷二磷葡萄糖脫氫酶抗體

貝母素乙ECE2(Endothelin Converting Enzyme 2)  內皮素轉化酶2抗原UGCGL2  二磷葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移酶2抗體

連翹苷ECP(eosinophil cationic protein)mouse rat  嗜性粒陽離子蛋白抗原UGCG/Ceramide glucosyltransferase  葡萄糖神經酰胺合成酶抗體

三七皂苷R1ED-1 (Ectodermal Dysplasia 1)  外胚層發(fā)育不良抗原UFD1L  泛素融合降解樣蛋白1抗體
轉基因玉米品系98140核酸檢測試劑盒Gliclazide　格列齊特　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Gliclazide　格列齊特（標準品）　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Glyburide/Gliebenclamide　格列本脲　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Glyburide/Gliebenclamide　格列本脲（標準品）　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Glimepiride　格列美脲(標準品)　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Glimepiride　格列美脲　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Griseofulvin;Fulcin　灰黃霉素　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Griseofulvin　灰黃霉素(標準品)　質量規(guī)格：>97.0%(GC)(T)

Sodiumhyaluronate　透明質鈉；玻璃鈉　質量規(guī)格：>97.0%(GC),進口

Hydrocortisone　　質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

Hydrocortisone?。藴势罚≠|量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

Ibutilidefumarate　富馬伊布利特　質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

Ibutilidefumarate　富馬伊布利特(標準品)　質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

IsepamicineSulphate　硫異帕米星　質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)

Bexarotene　蓓薩羅丁;貝沙羅汀　質量規(guī)格：>97.0%(HPLC)
PCR的反應條件：
因擴增片段的大小、反應體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數
根據模板DNA的量以及擴增片段的大小，設定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數太多，則會出現Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內設定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設定30秒～1分鐘；當溫度設定在68℃以下時, 時間設定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產物或者會有一些短的非特異性產物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現Smear。