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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡與增殖>> 細胞凋亡檢測試劑盒Ⅱ(AP)
| 貨號 | FS-X9664 |
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中文名稱：細胞凋亡檢測試劑盒Ⅱ(AP)
英文名稱：
產(chǎn)品規(guī)格：20T
貨號：FS-X9664
產(chǎn)品介紹:
保存條件：-20℃冰凍保存。 保存期：一年 工作原理： 在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細胞的死亡，其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚，時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活，細胞自身的染色質(zhì)或DNA 被切割，出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口，并產(chǎn)生與DNA斷點數(shù)目相同的3’-OH 末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標(biāo)記的dUTP(DIG-dUTP)標(biāo)記至3’-OH 末端，DIG-dUTP 結(jié)合在DNA斷點部位，可以通過生物su化抗抗體(Anti-DIG-Biotin)和 SABC-AP反應(yīng)后，加入顯色底物 BCIP/NBT予以顯示。凋亡的細胞核呈紫藍色，從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。 試劑盒內(nèi)容： 1.標(biāo)記緩沖液(Labeling Buffer)1ml 2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl 3.DIG-dUTP(×20)20μl 4.封閉液(Blocking Reagent)4ml 5.生物su化抗抗體(×100)20μl 6..SABC-AP(×100)20μl 7.Proteinase K(×200)50μl 8.BCIP/NBT 顯色劑(×20)0.2ml 9.抗體稀釋液4ml |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
酪氨suan激mei2(Tyk2)檢測試劑盒 forTyrosineKinase2(Tyk2)
白介su10(IL10)檢測試劑盒 forInterleukin10(IL10)
核糖核suanmeiP(RNASEP)檢測試劑盒 forRibonucleaseP(RNASEP)
血清淀粉樣蛋白A2(SAA2)檢測試劑盒 forSerumAmyloidA2(SAA2)
葡萄糖6磷suan異構(gòu)mei(GPI)檢測試劑盒 forGlucose6PhosphateIsomerase(GPI)
谷氨suan脫氫mei(GDH)檢測試劑盒 forGlutamateDehydrogenase1(GDH)
胰高血糖su樣肽1(GLP1)檢測試劑盒 forGlucagonLikePeptide1(GLP1)
低氧誘導(dǎo)因子2α(HIF2α)檢測試劑盒 forHypoxiaInducibleFactor2Alpha(HIF2a)
糖基化依賴性細胞黏附分子(GlyCAM1)檢測試劑盒 forGlycosylationDependentCellAdhesionMolecule1(GlyCAM1)
葡萄糖激mei(GCK)檢測試劑盒 forGlucokinase(GCK)
賴氨酰氧化mei(LOX)檢測試劑盒 forLysylOxidase(LOX)
核仁蛋白11(NOL11)檢測試劑盒 forNucleolarProtein11(NOL11)
激活suAB(ACVAB)檢測試劑盒 forActivinAB(ACVAB)
內(nèi)向整流型鉀離子通道亞家族J成員5(KCNJ5)檢測試劑盒 forPotassiumInwardlyRectifyingChannelSubfamilyJ,Member5(KCNJ5)
Ⅲ型前膠原氨基端原肽(PⅢNP)檢測試劑盒 forProcollagenIIIN-TerminalPropeptide(PIIINP)
趨化因子C-X-C-基元受體4(CXCR4)檢測試劑盒 forChemokineC-X-C-MotifReceptor4(CXCR4)
啶磷suan核糖轉(zhuǎn)移mei(UPRT)檢測試劑盒 forUracilPhosphoribosyltransferase(UPRT)
細胞凋亡檢測試劑盒Ⅱ(AP)莫能junsu鈉鹽標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Monensin Sodium
美加明相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:10mg 英文名稱：
benjiasuan標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Betamethasone Benzoate
葡萄籽低聚原花青su標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱：
jia磺suan溴隱亭標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:150mg 英文名稱：Bromocriptine Mesylate
馬標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:350mg 英文名稱：Mazindol CIV
生標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Naproxen
雙羥萘suan噻嘧啶標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:500mg 英文名稱：Pyrantel Pamoate
磺an嘧啶銀標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Silver Sulfadiazine
鹽suan大觀霉su標(biāo)準(zhǔn)品 規(guī)格:200mg 英文名稱：Spectinomycin Hydrochloride
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