DAPI溶液(即用型)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9668

中文名稱：DAPI溶液(即用型)

英文名稱：DAPI solution(ready-to-use)

產(chǎn)品規(guī)格：10ml|50mL

貨號：FS-X9668

產(chǎn)品介紹:

本產(chǎn)品為DAPI水溶液，為即用型工作液，可以直接用于固定細胞或組織的細胞核染色。

號：28718-90-3

分子式：C16H15N5·2HCl

分子量：350.25

純度：≥90% (HPLC和 TLC)

儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

DAPI(4’,6-二脒基-2-苯基吲哚)是一種能夠與DNA中大部分A，T堿基相互結(jié)合的熒光染料﹐常用于熒光顯微鏡觀測。因為DAPI可以透過完整的細胞膜﹐它可以用于活細胞和固定細胞的染色。當(dāng)DAPI與雙鏈DNA結(jié)合時，大吸收波長為358nm，大發(fā)射波長為461nm。DAPI的發(fā)射光為藍色，且DAPI和綠色熒光蛋白GFP或Texas Red染劑(紅色熒光染劑)的發(fā)射波長僅有少部分重疊，可以利用這項特性在單一的樣品上進行多重?zé)晒馊旧?/span>

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

牙骨質(zhì)蛋白1(CEMP1)elisa檢測試劑盒英文名稱：CEMP1 ELISA Kit，CEMP1，

血紅su氧合mei1(HO1)elisa檢測試劑盒英文名稱：HO1 ELISA Kit，HO1，

旋轉(zhuǎn)蛋白(RTTN)elisa檢測試劑盒英文名稱：RTTN ELISA Kit，RTTN，

信號su6A(SEMA6A)elisa檢測試劑盒英文名稱：SEMA6A ELISA Kit，SEMA6A，

α半乳糖mei(αGAL)elisa檢測試劑盒英文名稱：αGAL ELISA Kit，αGAL，

P53(P53)elisa檢測試劑盒英文名稱：P53 ELISA Kit，P53，

TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP/TDP43)elisa檢測試劑盒英文名稱：TARDBP/TDP43 ELISA Kit，TARDBP/TDP43，

GDP解離抑制因子2(GdI2)elisa檢測試劑盒英文名稱：GdI2 ELISA Kit，GdI2，

CD68分子(CD68)elisa檢測試劑盒英文名稱：CD68 ELISA Kit，CD68，

B細胞活化因子(BAFF)elisa檢測試劑盒英文名稱：BAFF ELISA Kit，BAFF，

Ⅰ型前膠原羧基末端前肽(PⅠCP)elisa檢測試劑盒英文名稱：PⅠCP ELISA Kit，PⅠCP，

25羥基維生suD2(25 HVD2)elisa檢測試劑盒英文名稱：25 HVD2 ELISA Kit，25 HVD2，

血小板內(nèi)皮細胞粘附分子1(PECAM1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PECAM1 ELISA Kit，PECAM1，

次級淋巴組織趨化因子6Ckine(CCL21)elisa檢測試劑盒英文名稱：CCL21 ELISA Kit，CCL21，

γ干擾su誘導(dǎo)單核細胞因子(MIG/CXCL9)elisa檢測試劑盒英文名稱：MIG/CXCL9 ELISA Kit，MIG/CXCL9，

谷氨suan[NMDA]受體亞基ε-2(NR-2)elisa檢測試劑盒英文名稱：NR-2 ELISA Kit，NR-2，

復(fù)合前列腺特異性抗原(CPSA)elisa檢測試劑盒英文名稱：CPSA ELISA Kit，CPSA，
DAPI溶液(即用型)泰諾福韋標準品規(guī)格:15mg 英文名稱：Tenofovir

鹽suan土霉su標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Oxytetracycline Hydrochloride

小白菊內(nèi)酯標準品規(guī)格:25mg 英文名稱：Parthenolide

磷suan奧斯他韋標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Oseltamivir Phosphate

lvben吩嗪標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Clofazimine

5-fu胞嘧啶標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flucytosine

泰諾福韋酯富馬suan鹽標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Tenofovir Disoproxil Fumarate

相關(guān)雜質(zhì)B標準品規(guī)格:25mg 英文名稱：Clonazepam Related Compound B

雙fu美松叔戊suan酯標準品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flumethasone Pivalate

度西汀相關(guān)物質(zhì)H標準品規(guī)格:ea 英文名稱：

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