CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9614

產(chǎn)品介紹:

CFSE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒是基于一種新型熒光探針CFDA SE的用于細(xì)胞增殖檢測和細(xì)胞熒光示蹤的檢測試劑盒。CFDA SE目前被廣泛用于替代MTT法或[3H]-thymidine摻入等其它細(xì)胞增殖檢測方法。

基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測結(jié)果*一致，但同時可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測可以提供整個細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。

CFDA SE 的全稱為Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester，分子式為C29H19NO11，分子量為557.47。CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時間可達(dá)數(shù)個月。CFSE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會減弱一半，這樣通過流式細(xì)胞儀檢測就可以檢測出沒有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。

CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測。

中文名稱：CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒

英文名稱：CFSE Cell Proliferation and Tracking Kit

產(chǎn)品規(guī)格：2000T

貨號：FS-X9614

實(shí)驗(yàn)報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

微粒體S轉(zhuǎn)移mei1(MGST1)檢測試劑盒 forMicrosomalGlutathioneSTransferase1(MGST1)

白介su2(IL2)檢測試劑盒 forInterleukin2(IL2)

分泌球蛋白家族2A成員2(SCGB2A2)檢測試劑盒 forSecretoglobinFamily2A,Member2(SCGB2A2)

腎胱su5(NPHP5)檢測試劑盒 forNephrocystin5(NPHP5)

速激肽受體1(TACR1)檢測試劑盒 forTachykininReceptor1(TACR1)

胰島su樣生長因子1(IGF1)檢測試劑盒 forInsulinLikeGrowthFactor1(IGF1)

旋轉(zhuǎn)蛋白(RTTN)檢測試劑盒 forRotatin(RTTN)

D-二聚體(D2D)檢測試劑盒 forD-Dimer(D2D)

內(nèi)皮su轉(zhuǎn)化mei1(ECE1)檢測試劑盒 forEndothelinConvertingEnzyme1(ECE1)

脊髓灰質(zhì)炎病毒受體相關(guān)分子4(PVRL4)檢測試劑盒 forPoliovirusReceptorRelatedProtein4(PVRL4)

Janus激mei3(JAK3)檢測試劑盒 forJanusKinase3(JAK3)

髓細(xì)胞觸發(fā)受體2(TREM2)檢測試劑盒 forTriggeringReceptorExpressedOnMyeloidCells2(TREM2)

脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂meiA2(LpPLA2)檢測試劑盒 forPhospholipaseA2,LipoproteinAssociated(LpPLA2)

載脂蛋白B48(APOB48)檢測試劑盒 forApolipoproteinB48(APOB48)

凝血mei原片段F1+2(F1+2)檢測試劑盒 forProthrombinFragment1+2(F1+2)

jia狀旁腺激su(PTH)檢測試劑盒 forParathyroidHormone(PTH)

促jia狀腺su(TSH)檢測試劑盒 forThyroidStimulatingHormone(TSH)
CFDA SE細(xì)胞增殖與示蹤檢測試劑盒美替拉tong標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Metyrapone

A相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：

標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Furosemide

水楊suan鈉標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:500mg 英文名稱：Sodium Salicylate

西他zuo相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱：

醋suanfu卡尼標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Flecainide Acetate

溴化十烴季an標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱：Decamethonium Bromide

尼汀標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:400mg 英文名稱：Levocarnitine

鹽suan芐非標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：

二類殘留溶劑-1,2-二lv乙烯標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1.2ml×3ampules 英文名稱：

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