細(xì)胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9548

英文名稱：Cell proliferation tracer fluorescence probe

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

貨號(hào)：FS-X9548

本品是一種近年來(lái)被廣泛應(yīng)用的細(xì)胞增殖檢測(cè)用熒光探針，也可以用于細(xì)胞的熒光示蹤。基于CFDA SE熒光標(biāo)記的細(xì)胞增殖檢測(cè)和[3H]-thymidine摻入、BrdU標(biāo)記獲得的檢測(cè)結(jié)果*一致，但同時(shí)可以提供更多的細(xì)胞增殖信息。使用CFDA SE檢測(cè)可以提供整個(gè)細(xì)胞群中有多少比例的細(xì)胞分裂了1次、2次或更多次數(shù)，同時(shí)如果和其它熒光探針聯(lián)用，可以獲取不同分裂次數(shù)細(xì)胞的其它相關(guān)信息。
產(chǎn)品介紹:

：150347-59-4

分子式：C29H19NO11

分子量：557.47

CFDA SE可以通透細(xì)胞膜，進(jìn)入細(xì)胞后可以被細(xì)胞內(nèi)的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，CFSE可以偶發(fā)性地(spontaneously)并不可逆地和細(xì)胞內(nèi)蛋白的Lysine殘基或其它氨基發(fā)生結(jié)合反應(yīng)，并標(biāo)記這些蛋白。在加入熒光探針CFDA SE后大約24小時(shí)，即可充分標(biāo)記細(xì)胞。被CFDA SE標(biāo)記的非分裂細(xì)胞的熒光非常穩(wěn)定，穩(wěn)定標(biāo)記的時(shí)間可達(dá)數(shù)個(gè)月。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，比以前使用的其它細(xì)胞示蹤熒光探針例如PKH26的熒光更加均一，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均勻。

由于CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均勻和穩(wěn)定，每分裂一次子代細(xì)胞的熒光會(huì)減弱一半，這樣通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)就可以檢測(cè)出沒(méi)有分裂的細(xì)胞，分裂一次的細(xì)胞(1/2的熒光強(qiáng)度)，分離兩次的細(xì)胞(1/4的熒光強(qiáng)度)，分裂三次的細(xì)胞(1/8的熒光強(qiáng)度)以及類似的其它分裂次數(shù)的細(xì)胞。采用CFDA SE通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)獲得的檢測(cè)結(jié)果參考右圖。每一個(gè)峰代表一種分裂次數(shù)的細(xì)胞，從右至左的峰通常依次為分裂0次、1次、2次、3次等次數(shù)的細(xì)胞。分裂次數(shù)較多后，分裂0次或1次等沒(méi)有分裂或分裂次數(shù)較少的細(xì)胞會(huì)逐漸減少直至檢測(cè)不到。

使用CFDA SE可以檢測(cè)分裂多達(dá)8次或更多次數(shù)的細(xì)胞增殖。目前CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)，甚至還可以用于細(xì)菌增殖的檢測(cè)。

CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為518nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞也可以用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察。 CFDA SE標(biāo)記的細(xì)胞無(wú)論在體外還是體內(nèi)都不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色。即CFDA SE熒光探針完成標(biāo)記后不會(huì)從一個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移到鄰近細(xì)胞。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞僅需5-15分鐘即可完成。對(duì)于不同細(xì)胞，佳標(biāo)記時(shí)間需自行摸索。

CFDA SE可以使用無(wú)水DMSO(anhydrous DMSO)配制，配制濃度通常為2-10mM。配制好的溶液宜當(dāng)天使用完畢，不宜長(zhǎng)時(shí)間保存。CFDA SE標(biāo)記細(xì)胞時(shí)的終濃度通常為0.2-10μM或更高一些。在工作濃度為5μM時(shí)，一個(gè)包裝的本產(chǎn)品共可以標(biāo)記約1.8升的細(xì)胞。

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期6個(gè)月。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

突觸融合蛋白2(STX2)檢測(cè)試劑盒 forSyntaxin2(STX2)

巖藻糖基轉(zhuǎn)移mei8(FUT8)檢測(cè)試劑盒 forFucosyltransferase8(FUT8)

生長(zhǎng)抑su(SST)檢測(cè)試劑盒 forSomatostatin(SST)

解整合su金屬蛋白mei9(ADAM9)檢測(cè)試劑盒 forADisintegrinAndMetalloprotease9(ADAM9)

N-jia基-D-天氡氨suan離子能谷氨suan受體1(GRIN1)檢測(cè)試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,N-Methyl-D-Aspartate1(GRIN1)

線粒體乙醛脫氫mei(ALDM)檢測(cè)試劑盒 forAldehydeDehydrogenase,Mitochondrial(ALDM)

細(xì)胞周期suY(CCNY)檢測(cè)試劑盒 forCyclinY(CCNY)

AMPA離子能谷氨suan受體3(GRIA3)檢測(cè)試劑盒 forGlutamateReceptor,Ionotropic,AMPA3(GRIA3)

磷脂酰肌chun特異性磷酯meiCβ1(PLCβ1)檢測(cè)試劑盒 forPhospholipaseCBeta1,PhosphoinositideSpecific(PLCb1)

白介su1β(IL1β)檢測(cè)試劑盒 forInterleukin1Beta(IL1b)

凋亡相關(guān)因子配體(FASL)檢測(cè)試劑盒 forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)

jia狀旁腺激su(PTH)檢測(cè)試劑盒 forParathyroidHormone(PTH)

激肽釋放mei3(KLK3)檢測(cè)試劑盒 forKallikrein3(KLK3)

淋巴細(xì)胞抗原96(LY96)檢測(cè)試劑盒 forLymphocyteAntigen96(LY96)

蛋白mei體亞基α1(PSMα1)檢測(cè)試劑盒 forProteasomeSubunitAlphaType1(PSMa1)

橋粒芯糖蛋白4(DSG4)檢測(cè)試劑盒 forDesmoglein4(DSG4)

血小板因子4V1(PF4V1)檢測(cè)試劑盒 forPlateletFactor4Variant1(PF4V1)
細(xì)胞增殖示蹤熒光探針(CFDA SE)ben芴chun標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Lumefantrine

環(huán)磷酰an相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：

fu康z(mì)uo相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:10mg 英文名稱：

標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱：Warfarin

三正丁基氧化磷標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:25mg 英文名稱：Tributyl Phosphine Oxide

卡麥角林標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱：Cabergoline

鹽suan阿夫zuo嗪標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:150mg 英文名稱：Alfuzosin Hydrochloride

枸櫞suan鉍標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:100mg 英文名稱：Bismuth Citrate

番瀉A標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱：Sennoside A

膽suan標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:2g 英文名稱：Cholic Acid (AS)

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