DAPI溶液(5mg/ml)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9551

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：DAPI溶液(5mg/ml)

英文名稱：DAPI Solution

產(chǎn)品規(guī)格：5mg/ml×0.2ml

貨號：FS-X9551

產(chǎn)品介紹:

本品DAPI是一種可以穿透細胞膜的藍色熒光染料。和雙鏈DNA結(jié)合后可以產(chǎn)生比DAPI自身強20多倍的熒光。和EB(ethidium bromide)相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。

DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。

DAPI的大激發(fā)波長為340nm，大發(fā)射波長為488nm；DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后，大激發(fā)波長為364nm，大發(fā)射波長為454nm。

本DAPI溶液用水配制，濃度為5mg/ml。用于細胞核染色時，推薦的DAPI工作濃度為0.5-10μg/ml。

：28718-90-3

分子式：C16H15N5·2HCl

分子量：350.25

儲存條件：-20℃避光，有效期一年。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

橋粒芯膠粘蛋白2(DSC2)檢測試劑盒 forDesmocollin2(DSC2)

磷脂酰乙-N-jia基轉(zhuǎn)移mei(PEMT)檢測試劑盒 forPhosphatidylethanolamine-N-Methyltransferase(PEMT)

α1-suan性糖蛋白(α1AGP)檢測試劑盒 forAlpha-1-AcidGlycoprotein(a1AGP)

上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒 forCadherin,Epithelial(CDHE)

T-細胞激活連接蛋白(LAT)檢測試劑盒 forLinkerForActivationOfT-Cell(LAT)

胱硫醚β合mei(CβS)檢測試劑盒 forCystathionineBetaSynthase(CbS)

連環(huán)蛋白α2(CTNNα2)檢測試劑盒 forCateninAlpha2(CTNNa2)

唾液suan結(jié)合Ig樣凝集su3(SIGLEC3)檢測試劑盒 forSialicAcidBindingIgLikeLectin3(SIGLEC3) 激肽釋放mei原(PK)檢測試劑盒 forPrekallikrein(PK)

脂質(zhì)運載蛋白12(LCN12)檢測試劑盒 forLipocalin12(LCN12)

超氧化物歧化mei1(SOD1)檢測試劑盒 forSuperoxideDismutase1,Soluble(SOD1)

轉(zhuǎn)化生長因子β2(TGFβ2)檢測試劑盒 forTransformingGrowthFactorBeta2(TGFb2)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒 forBoneMorphogeneticProtein2(BMP2)

白介su1ε(IL1ε)檢測試劑盒 forInterleukin1Epsilon(IL1e)

Ki-67蛋白(Ki67P)檢測試劑盒 forKi-67Protein(Ki67P)

骨成型蛋白2(BMP2)檢測試劑盒 forBoneMorphogeneticProtein2(BMP2)

S100鈣結(jié)合蛋白A6(S100A6)檢測試劑盒 forS100CalciumBindingProteinA6(S100A6)
DAPI溶液(5mg/ml)洋地黃標準品規(guī)格:3g 英文名稱：Digitalis

羊毛脂chun標準品規(guī)格:5g 英文名稱：Lanolin Alcohols

鹽suan坦索羅辛外消旋化合物標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：

魚油標準品規(guī)格:1g 英文名稱：Fish Oil

左卡巴斯汀相關(guān)物質(zhì)A標準品規(guī)格:50mg 英文名稱：

礦物油標準品規(guī)格:1．5ml 英文名稱：Mineral Oil

芝麻油標準品規(guī)格:1ml×2ampules 英文名稱：Sesame Oil (AS)

4,4'-二氨基二ben砜標準品規(guī)格:125mg 英文名稱：Dapsone

羊毛脂標準品規(guī)格:20g 英文名稱：Lanolin (20 g)

小燭樹蠟標準品規(guī)格:250mg 英文名稱：Candelilla Wax
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)