酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9720

產(chǎn)品介紹:

AlamarBlue 酵母活性檢測試劑盒是應(yīng)用新型的氧化還原指示劑阿爾瑪藍(lán)快速高靈敏度檢測酵母活性的比色檢測產(chǎn)品。

AlamarBlue 是一種氧化還原指示劑，能根據(jù)酵母的代謝活性產(chǎn)生吸光度變化和熒光信號。這種測定是基于具有代謝活性的細(xì)胞將試劑轉(zhuǎn)換成熒光和比色指示劑的能力。受損和無活性細(xì)胞具有較低的天然代謝活性，因此對應(yīng)的信號較低。

AlamarBlue 在氧化狀態(tài)下呈現(xiàn)紫藍(lán)色無熒光性，而在還原狀態(tài)下，轉(zhuǎn)變?yōu)槌史奂t或紅色熒光的還原產(chǎn)物，其吸收峰為530-560nm，而散射峰為590nm。在酵母細(xì)胞增殖過程中，細(xì)胞內(nèi)處于還原環(huán)境。進(jìn)入酵母細(xì)胞內(nèi)的活性檢測染料被代謝中間體及細(xì)胞色素類還原后釋放到酵母細(xì)胞外并溶于培養(yǎng)基中，使培養(yǎng)基從無熒光的靛青藍(lán)變成有熒光的粉紅色。后用普通分光光度計(jì)或熒光光度計(jì)進(jìn)行檢測，吸光度和熒光強(qiáng)度與活性酵母細(xì)胞數(shù)成正比。染料經(jīng)過驗(yàn)證安全無毒，可以用于酵母細(xì)胞活性和酵母細(xì)胞增殖的定量分析細(xì)胞毒性研究。

AlamarBlue 的無毒特性使酵母細(xì)胞可長期暴露于這種染料，因此可隨時(shí)間進(jìn)行測量或進(jìn)行終點(diǎn)測量。

AlamarBlue 法采用單一試劑，可以連續(xù)、快速地檢測酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)。由于AlamarBlue對酵母細(xì)胞無毒、無害，不影響細(xì)胞的蛋白質(zhì)合成與分泌等活性，因此可以對同一批酵母細(xì)胞的增生狀態(tài)進(jìn)行連續(xù)觀察和進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)觀察，因此有操作簡便和幾乎不干擾酵母細(xì)胞正常代謝的特點(diǎn)。

儲存條件：檢測液2-8℃避光保存；

有效期：一年。

中文名稱：酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：250T|500T|1000T

貨號：FS-X9720

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

大內(nèi)皮(Big ET)英文名：Big ET 溶血磷脂?；D(zhuǎn)移D抗體包裝1g

大動脈平滑肌肌動蛋白α2(Acta2/Actsa/Actvs)英文名：Acta2/Actsa/Actvs 載脂蛋白E3抗體包裝250mg

催乳抑制激(PIH)英文名：PIH ABI基因家族2抗體包裝1g

催乳釋放激(PRH)英文名：PRH 氧化蛋白質(zhì)解包裝5g

催乳(PRL)英文名：PRL 鐵調(diào)節(jié)蛋白2抗體包裝500mg

催產(chǎn)(OT)英文名：OT 乙脫氫1型抗體包裝50mg

促有絲分裂因子(MF/MPF)英文名：MF/MPF AFP4a蛋白抗體包裝1g

促性腺激釋放激(GnRH)英文名：GnRH Rho GTP激活蛋白32抗體包裝250mg

促生長激釋放激(GHRH)英文名：GHRH 能量平衡相關(guān)蛋白抗體包裝5g

促腎上腺皮質(zhì)激釋放因子(CRF)英文名：CRF 禽腦脊髓炎病AEV抗體包裝5mg

促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)英文名：ACTH 腺苷環(huán)化7抗體包裝25g

促腎上皮質(zhì)激釋放激(CRH)英文名：CRH 腺苷環(huán)化4抗體包裝5g

促卵泡(FSH)英文名：FSH 腺苷活化蛋白激γ1抗體包裝1g

促狀腺釋放激(TRH)英文名：TRH 芳香N-乙?；D(zhuǎn)移抗體包裝1g

促狀腺(TSH)英文名：TSH 腺苷環(huán)化8抗體包裝1g

三磷腺苷結(jié)合轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白G超家族成員2抗體結(jié)締組織生長因子(CTGF)AR-A014418 is an ATP-competitive, and selective GSK3β inhibitor with IC50 and Ki
酵母活性檢測試劑盒-AlamarBlue丁香假單胞 4-羥基-6-喹唑啉基質(zhì)金屬蛋白8

異常威克漢姆酵母 6--4-羥基喹唑啉基質(zhì)金屬蛋白9

假交替單胞屬 2-甲氧基-3-硝基-4-基質(zhì)金屬蛋白抑制因子1

棲土曲霉 1-乙酰-4-基質(zhì)金屬蛋白抑制因子2

蜥蜴纖細(xì)芽孢桿 2-(1H-吡唑-1-基)乙酸基質(zhì)金屬蛋白抑制因子3

釀酒酵母 5--6-甲基基質(zhì)裂解蛋白;基質(zhì)溶

*櫻桃鏈格孢 1-(3-甲氧基苯基)哌基質(zhì)裂解

金龜子綠僵 N,N-二甲基1,4-丁烷二基質(zhì)衍生因子1

釀酒酵母 4-甲基-2-戊基-1,3-二氧戊環(huán)基質(zhì)衍生因子1α

Sphingobium rhizovicinum 2--5-甲氧基苯并咪唑基質(zhì)衍生因子1β

大腸埃希氏 3,4-二甲氧基甲酯基質(zhì)相互作用分子1

小孢擬盤多毛孢 N-Boc-4-亞甲基激活A(yù)

盤長孢狀盤孢 2'-F-Ac-dC亞磷酰單體敏感性脂肪

玫煙色棒束孢 N-乙?；?5'-O-[雙(4-甲氧基苯基)苯基]-2'-脫氧-2'-氟胞苷激肽釋放10

豬鏈球分型血清參考品血清型 SS3 3-氟-2-激肽釋放11

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