CFSE細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9721

產(chǎn)品介紹：

熒光染料CFSE(CFDA-SE)，是一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的新型染料，可以標(biāo)記活體細(xì)胞。CFSE是一種帶有琥珀酰亞胺(NHS)的熒光染料，可以結(jié)合細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)。CFSE在結(jié)構(gòu)上將酚羥基部位改造成AM 體，所以自身不發(fā)熒光，熒光背景低，脂溶性高，能夠輕易穿透細(xì)胞膜，在活細(xì)胞內(nèi)與胞內(nèi)蛋白共價(jià)結(jié)合，進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的CFSE的AM 部位能被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解發(fā)出綠色熒光。CFSE的琥珀酰亞胺(NHS)和細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基部位結(jié)合，固定在細(xì)胞內(nèi)，不會(huì)漏出細(xì)胞外。CFSE 進(jìn)入細(xì)胞后定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核，在細(xì)胞核的熒光強(qiáng)。

在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，CFSE的熒光強(qiáng)度會(huì)隨著細(xì)胞的分裂而逐級(jí)遞減，標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，因此其熒光強(qiáng)度是親代細(xì)胞的一半，根據(jù)這一特性，它可被用于檢測(cè)細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期的估算及細(xì)胞分裂等方面。CFSE標(biāo)記細(xì)胞的熒光非常均一，優(yōu)于以前使用的其他細(xì)胞示蹤熒光探針如PKH26，并且分裂后的子代細(xì)胞的熒光分配也更均一。在細(xì)胞分裂增殖過(guò)程中，CFSE標(biāo)記熒光可平均分配至兩個(gè)子代細(xì)胞中，熒光強(qiáng)度變?yōu)橛H代細(xì)胞的一半，通過(guò)流式細(xì)胞儀(FL1 通道)根據(jù)熒光強(qiáng)度的不同，可檢測(cè)出未分裂細(xì)胞，分裂一次(1/2的熒光強(qiáng)度)，二次(1/4的熒光強(qiáng)度)，三次(1/8的熒光強(qiáng)度)，以及更多分裂次數(shù)的細(xì)胞。CFSE可檢測(cè)分裂次數(shù)多達(dá)八次甚至更多。經(jīng)CFSE標(biāo)記的細(xì)胞可用于體外和體內(nèi)增殖研究，且具有不會(huì)使鄰近細(xì)胞染色的功能。

CFSE標(biāo)記的細(xì)胞用于體內(nèi)觀(guān)察可以長(zhǎng)達(dá)數(shù)周之久，它常被用來(lái)做活體細(xì)胞檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和用熒光電鏡觀(guān)察細(xì)胞長(zhǎng)期活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)。CFSE 毒性小，不影響細(xì)胞的增殖能力。此方法操作簡(jiǎn)單，且不用放射性同位素，不存在安全隱患?？梢愿焖?，更準(zhǔn)確和更安全地得到想要的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

CFSE標(biāo)記細(xì)胞后通常用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞增殖檢測(cè)。常用于淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè)，也可以用于成纖維細(xì)胞、NK 細(xì)胞等其它細(xì)胞的增殖檢測(cè)。

CFSE標(biāo)記細(xì)胞呈綠色熒光，熒光波長(zhǎng)：λex=496 nm,λem=516 nm。流式檢測(cè)時(shí)的激發(fā)波長(zhǎng)可以選擇488nm，此時(shí)的發(fā)射波長(zhǎng)為516nm，使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)時(shí)可以采用FL1 detection channel。CFSE標(biāo)記的細(xì)胞除了流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞增殖外，還可用熒光酶標(biāo)板定量活細(xì)胞數(shù)目，或者用熒光顯微鏡進(jìn)行均一染色的細(xì)胞示蹤觀(guān)察。

儲(chǔ)存條件：CFSE須-20℃避光保存，注意防潮。

有效期：六個(gè)月。

產(chǎn)品屬性：

產(chǎn)品名稱(chēng)	英文名稱(chēng)	產(chǎn)品規(guī)格	產(chǎn)品貨號(hào)
CFSE細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒		500T	FS-X9721

注意事項(xiàng)：

1、本試劑盒僅供科學(xué)研究使用，不可用于診斷或治療。

2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3、禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4、樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。

7、需長(zhǎng)時(shí)間保存可-20℃避光保存。避免反復(fù)凍融，否則將會(huì)增加空白吸收，從而影響檢測(cè)結(jié)果。最好小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。

8、用培養(yǎng)基或 PBS 來(lái)配制待檢測(cè)藥物。如果待測(cè)藥物有還原性，則測(cè)定不含細(xì)胞，僅含有 MTS 的待測(cè)藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入 MTS ，如果吸光度相對(duì)較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用新鮮培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次，然后加入新的 100 μl 培養(yǎng)基和 10 μl MTS 進(jìn)行檢測(cè)。

9、細(xì)胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細(xì)胞。

10、加 MTS 溶液后孵育時(shí)間的長(zhǎng)短根據(jù)細(xì)胞的類(lèi)型和細(xì)胞的密度等實(shí)驗(yàn)情況而定，對(duì)于大多數(shù)情況孵育 1 小時(shí)即可，白細(xì)胞需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。

11、如果不是使用 96 孔板檢測(cè)，MTS 溶液的用量相應(yīng)等比例增加即可。

操作步驟：

1、貼壁細(xì)胞的消化

①吸除培養(yǎng)液，用無(wú)菌 PBS、Hanks 液或無(wú)血清培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞一次，以去除殘余的血清。

②加入少量Trypsin-EDTA solution，略蓋過(guò)細(xì)胞即可，室溫放置 0.5～2min，不同的細(xì)胞消化時(shí)間有所不同。

③顯微鏡下觀(guān)察，細(xì)胞明顯收縮，并且肉眼觀(guān)察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變

化；或者用槍吹打細(xì)胞發(fā)現(xiàn)細(xì)胞剛好可以被吹打下來(lái)，吸除細(xì)胞消化液。加入含血清的 *細(xì)胞培養(yǎng)液，吹打下細(xì)胞，即可直接用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

④如果發(fā)現(xiàn)消化不足，則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。

⑤如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞消化時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，未及吹打細(xì)胞，細(xì)胞已經(jīng)有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落，直接用細(xì)胞培養(yǎng)液把細(xì)胞全部吹打下來(lái)。1000～2000g 離心 1min，沉淀細(xì)胞，盡量去除細(xì)胞消化液后，加入含血清的*培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，即可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

2、組織的消化不同的組織需要消化的時(shí)間相差很大，通常以消化后可以充分打散組織為宜。

促狀腺激(TSH)英文名：TSH 腺苷環(huán)化10抗體包裝5g

促黃體激(LH)英文名：LH 腺苷環(huán)化5抗體包裝25g

促紅細(xì)胞生成(EPO)英文名：EPO 腺苷環(huán)化6抗體包裝5g

雌三(E3)英文名：E3 腺苷環(huán)化9抗體包裝5g

雌激硫轉(zhuǎn)移(SULT1E1)英文名：SULT1E1 肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白2（2號(hào)染色體）抗體包裝1g

雌激(E)英文名：E 三磷腺檸檬裂解抗體包裝5g

雌二受體(ER)英文名：ER β淀粉樣蛋白前體結(jié)合蛋白B-1抗體包裝25g

雌二(E2)英文名：E2 內(nèi)收蛋白a1抗體包裝5g

垂體腺苷環(huán)化激活肽(PACAP)英文名：PACAP α2纖溶色上皮衍生因子抗體包裝100ml

垂草扁桃(VMA)英文名：VMA 膜粘連蛋白7抗體包裝25ml

穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)英文名：PF/PFP 早老γ分泌抗體包裝5ml

程序性死亡1(PD-1)英文名：PD-1 鈉ATP蛋白a1抗體包裝100ml

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子9(FGF9)英文名：FGF9 Rho鳥(niǎo)苷交換因子2抗體包裝25ml

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子8(FGF8)英文名：FGF8 磷化Rho鳥(niǎo)苷交換因子2抗體包裝1g

成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子6(FGF6)英文名：FGF6 去整合樣金屬蛋白9抗體包裝25g

載脂蛋白E抗體結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)Clemizole is a H1 histamine receptor antagonist.Recently, researchers have ident
CFSE細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒微黃綠鏈霉 1-十二烷基溴化鎂激肽釋放2

炭黑曲霉 (R)-N-叔丁氧羰基-3-氨基-3-苯基-1-激肽釋放6

多產(chǎn)色鏈霉 1,3,5-三(二甲基基)-1,3,5-六氫化三激肽原

喬木鏈格孢 3-溴-5-硝基-2-羥基吡啶激肽原1

腐皮殼 Fmoc-statine低密度脂蛋白

樹(shù)舌 4-三氟甲基低密度脂蛋白受體

米根霉乙酸金 (metals basis)集落激因子

藍(lán)微褐鏈霉 3-甲基-4-吡唑幾丁質(zhì)3樣蛋白1

膠孢 1-環(huán)丁基肼鹽酸鹽己糖激

孢木霉 3-溴-1,2-苯二己糖激II

長(zhǎng)孺孢 2-基-2-甲基酸乙酯喋呤

灰色產(chǎn)色鏈霉 4,6-二羥基-5-溴嘧啶甲基二酸

星孢毛銹傘 4-甲脒鹽酸鹽（易）甲殼質(zhì)蛋白40

鏈格孢 1-Cbz-4-氨甲基

固氮 L-高精酸甲胎蛋白

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