細(xì)胞活性檢測試劑盒-綠色熒光-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9722

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：細(xì)胞活性檢測試劑盒-綠色熒光

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：500T|1000T

貨號：FS-X9722

產(chǎn)品介紹:

綠色熒光細(xì)胞活性檢測試劑盒是采用C01細(xì)胞活性探針檢測細(xì)胞活性的試劑盒。C01細(xì)胞活性探針是一種可以對活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞活性染色試劑，當(dāng)C01熒光探針其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后，酯酶會(huì)將其水解并留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光，熒光強(qiáng)度與活細(xì)胞數(shù)量成正比。

C01細(xì)胞活性探針是一種性合成的綠色熒光探針，其本身熒光極低，進(jìn)入活性細(xì)胞并被活細(xì)胞的酯酶剪切生成強(qiáng)綠色熒光的產(chǎn)物。綠色熒光產(chǎn)物的的激發(fā)和發(fā)射波長分別為488nm和520nm。C01細(xì)胞活性探針的細(xì)胞毒性很低，不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能如增殖。使用C01細(xì)胞活性探針的活性檢測的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)的51Cr-釋放法所得結(jié)果相一致。

儲(chǔ)存條件：C01探針-20℃防潮避光保存；

探針稀釋液2-8℃保存。

探針稀釋液長期不用可以-20℃保存。

有效期：一年。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

成纖維細(xì)胞生長因子4(FGF4)英文名：FGF4 艾滋病病制約錨定蛋白抗體包裝5g

成纖維細(xì)胞生長因子13(FGF-13)英文名：FGF-13 腺苷環(huán)化1抗體包裝1g

成纖維細(xì)胞生長因子10(FGF10)英文名：FGF10 核糖核L抑制蛋白抗體包裝5g

超氧化物歧化(SOD)英文名：SOD Rho GTP激活蛋白24抗體包裝25g

超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)英文名：hs-CRP GTP激活蛋白ASAP3抗體包裝5g

腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)英文名：iFABP 激活受體1C抗體包裝25g

叉頭框蛋白03(FoxP3)英文名：FoxP3 整合樣金屬蛋白與凝血13型抗體包裝1g

層連蛋白/板層(LN)英文名：LN 去整合樣金屬蛋白11抗體包裝25g

草胺膦乙酰轉(zhuǎn)移(PAT)英文名：PAT 去整合樣金屬蛋白12抗體包裝5g

不對稱二基精(ADMA)英文名：ADMA 去整合樣金屬蛋白15抗體包裝1g

補(bǔ)體因子H(CFH)英文名：CFH 去整合樣金屬蛋白2抗體包裝25g

補(bǔ)體片斷5a(C5a)英文名：C5a 載脂蛋白E2受體抗體包裝5g

補(bǔ)體片斷3a(C3a)英文名：C3a 腺苷A1受體抗體包裝100g

補(bǔ)體蛋白5(C5)英文名：C5 通道蛋白0抗體包裝1g

補(bǔ)體蛋白4(C4)英文名：C4 轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體包裝25g

淀粉樣肽前體蛋白抗體結(jié)締組織生長因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
細(xì)胞活性檢測試劑盒-綠色熒光棒桿 5-溴-3-氟-2(1H)-吡啶酮甲胎蛋白異質(zhì)體3

紅緣層孔 2,5-二溴-3-氟吡啶甲肟前列腺D2

異配囊接霉 3-溴-2-氟甲狀旁腺

達(dá)里湖芽孢桿 4-芐氧基-3,5-二氟苯酸甲狀腺抗體;甲狀腺激球蛋白

蒂蓋姆頭珠霉乙酰酮鈰水合物甲狀腺激阻斷抗體

相思根瘤 2,3-二氟-4-丁氧基苯酸甲狀腺過氧化物

那波鏈霉 5-溴-7-甲基-1H-吲唑甲狀腺結(jié)合球蛋白

氨酸棒桿呋喃酚甲狀腺鈉轉(zhuǎn)運(yùn)體

平菇 6-羧基六熒光甲狀腺球蛋白

羅爾細(xì)薄 6-羧基四熒光甲狀腺受體相互作用蛋白6

根腐平臍蠕孢 4-(三氟甲基)鹽酸鹽甲狀腺

布氏乳桿 2,6-二氟吡啶-3-甲間變性瘤激

psilent-dual1(pSD1) 5,10-二氫-5,10-二甲基吩間皮

哈氏弧三聚聚磷酸鹽堿性成纖維生長因子

銅綠假單胞(綠膿桿)* 對異丁堿性成纖維生長因子9
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)