高保真KOD試劑盒-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X9729

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：高保真KOD試劑盒

英文名稱：

產品規(guī)格：50U/200U/1000U

貨號：FS-X9729

產品介紹:

KOD DNA polymerase 是從克隆有α –型高保真DNA聚合酶的大腸桿菌中分離純化所得，具有3`→5`核酸外切酶活性，保真性能比普通Taq聚合酶高80倍。具有較高的延伸速率，在推薦的條件下大于每分鐘2kb，PCR產物為平端，可與直接接入本公司Blunt平端連接載體中。用于高保真、快速擴增目標DNA，環(huán)拉法引入點突變，補平DNA粘性末端等。

經酶切實驗檢測無外源核酸酶污染，PCR方法未檢測到宿主DNA殘留，能夠有效擴增大腸桿菌基因組DNA。

酶活定義：

在推薦的緩沖反應體系中，以大馬哈魚精DNA為模板，68℃、30min內合成10nmol核酸所需要的酶量為一個活性單位。

保存條件：

儲存溶液為：50mM Tris-HCl（pH7.6），50mM KCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50%(V/V) glycerol，－20℃存放一年，無明顯活性喪失。冰袋運輸。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

γ干擾受體(IFN-γR)英文名：IFN-γR 芳基硫酯A抗體包裝1g

γ干擾(IFN-γ)英文名：IFN-γ 擬南芥ACA11抗體包裝1g

γ干擾(IFNγ)英文名：IFNγ AHA3抗體（擬南芥）包裝250mg

γ分泌(GACE)英文名：GACE 磷化鈉ATP蛋白a1抗體包裝5g

γ-基丁(GABA)英文名：GABA 磷化凋亡信號調節(jié)激1抗體包裝50MG

γ基丁(GABA)英文名：GABA 中性膽固酯解1抗體包裝1g

β抑制蛋白2(ARRB2)英文名：ARRB2 人星形膠質抗體包裝5g

β血小板球蛋白/β血栓環(huán)蛋白(β-TG)英文名：β-TG 縮A抗體包裝100g

β細胞(BTC)英文名：BTC 膜粘連蛋白6抗體包裝25g

β位淀粉樣前體蛋白裂解1(BACE1)英文名：BACE1 β淀粉樣肽（25-35）抗體包裝500g

β葡萄糖醛苷(βGD)英文名：βGD 血管緊張I抗體包裝1g

β葡糖苷(β-glucosidase)英文名：β-glucosidase 腎上腺髓質抗體(N端20肽)包裝250mg

β內酰胺抑制劑(BLI)英文名：BLI ADP核糖基化因子結合蛋白2抗體包裝5g

β內啡肽受體(β-EPR)英文名：β-EPR 精加壓受體2抗體包裝25g

β內啡肽(β-EP)英文名：β-EP 凋亡相關斑點樣蛋白ASC抗體包裝5g

磷化蛋白激B抗體基質金屬蛋白10(MMP10)RG108 (N-Phthalyl-L-tryptophan) 是一種非核苷的 DNA 基轉移 (DNMTs) 抑制劑 (IC50=115 nM)，RG10
高保真KOD試劑盒Pontibacter 2-溴芐抗上皮生長抑制因子

銅綠假單胞 3-氨基-N-甲基芐抗神抗體

釀酒酵母 2-溴-5-羥基苯抗神經元核抗體1型;抗Hu抗體

擬革蓋 3-乙抗腎小球基底膜抗體

球孢白僵 3-氟--5-甲抗雙鏈DNA抗體;天然DNA抗體

靈芝 2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊環(huán)抗體球蛋白A

高大毛殼 5-氟-2-甲氧基苯抗天然脫氧核糖核酸抗體

佛雷德里克斯堡假單胞二苯基乙?？估w維蛋白抗體

大腸埃希 3-甲氧基甲酯抗小核糖核蛋白;Sm抗體

金針菇（毛柄、冬菇） 4,7-二滿二酮抗心磷脂IgA抗體

靈芝鏈脲抗心磷脂IgG抗體

大腸埃希氏 2--4-三氟甲基-嘧啶-甲酸乙酯抗心磷脂IgM抗體

巨大芽孢桿乙酰酮銪(III)水合物抗信號識別顆?？贵w

韓芝 3-溴-5-抗胸腺球蛋白

植物乳桿 2-甲基-3-硝基吡啶抗血小板IgA抗體
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)