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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>光合作用系列>> 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法
貨號(hào) | BJ-016111-2 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | BJ-016111-2 |
商品介紹:
測(cè)定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要?dú)涫荏w,生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時(shí),形成大量的ROS,同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過(guò)這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說(shuō)明細(xì)胞呼吸耗氧量較高,處于過(guò)氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。 測(cè)定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測(cè)吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
輔酶ⅡNADP(H)含量測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/24樣 可見分光光度法
NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/48樣 微量法
NAD激酶(NADK)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/24樣 可見分光光度法
NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
NADP磷酸酶(NADPase)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 可見分光光度法
6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
6磷酸葡萄糖脫氫酶(G6PDH)/葡萄糖6磷酸脫氫酶測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
胞漿異檸檬酸脫氫酶(ICDHc)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
NADP蘋果酸酶(NADPME)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
NADP蘋果酸酶(NADPME)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
NAD蘋果酸酶(NADME)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 100管/96樣 微量法
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 10管/9樣 紫外分光光度法
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 25管/24樣 紫外分光光度法
脂肪酸合成酶(FAS)測(cè)試盒 輔酶Ⅱ系列 50管/48樣 紫外分光光度法
AIMP2抗體
乙酰酶抗體
5-氨基乙酰丙酸合酶1抗體
防御素α1/3抗體
ABC膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抗體
植物延長(zhǎng)蛋白
A-Raf抗體
磷酸化A-Raf抗體
紅細(xì)胞腺苷脫氨酶3抗體
雄激素結(jié)合蛋白抗體
肝再生增強(qiáng)因子抗體
APP/ABPP淀粉樣肽前體蛋白抗體
甲胎蛋白單克隆抗體
甲胎蛋白單克隆抗體
ADP核糖基化因子結(jié)合蛋白1抗體
芳香烴受體抗體
吸引素抗體
腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體
蛋白激酶B2
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒可見分光光度法血管生成素2抗體
芳香化酶/細(xì)胞色素P450/雌激素合成酶抗體
腺苷A2A受體抗體
蛋白激酶A錨定蛋白95抗體
頂膜鈉依賴性膽鹽轉(zhuǎn)運(yùn)體蛋白抗體
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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