使用方法:
一、樣品 DNA 的制備
用自選方法提取 Cps DNA。注意：DNA 純化方法是決定檢測靈敏度的關(guān)鍵因素。如果不能很好純化樣品 DNA，后面的 PCR 再靈敏也不能提高整體檢測靈敏度。
二、制備 Cps 標(biāo)準(zhǔn)曲線（以 10-10E6 這 6 個 10 倍稀釋度為例。由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體病毒做陽性對照，只提供沒有傳染性的、可以直接使用的 DN**段作為陽性對照。
1. 標(biāo)記 6 個離心管，分別為 6，5，4，3，2 和 1 號。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 超純水（用帶芯槍頭，下同）。
3. 先將本試劑盒提供的陽性對照用 TE 緩沖液或超純水 10 倍梯度稀釋到10E7 拷貝/μL（注：請不要將本試劑盒提供的標(biāo)準(zhǔn)品一次性稀釋至 10E7拷貝/μL，建議每次稀釋 10 倍，梯度稀釋至 10E7 拷貝/μL）。
4. 在 6 號管中加入 5 μL 10E7 拷貝/μL 的 Cps 陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 10E6 拷貝/μL 的陽性對照。
5. 換槍頭，從 6 號管中取 5 μL 溶液到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 10E5拷貝/μL 的陽性對照。
6. 換槍頭，從 5 號管中取 5 μL 溶液到 4 號管中，重復(fù)上面的操作直到得到 6個稀釋度的陽性對照。
7. NC 管中不加任何陽性對照。
8. 從 1-6 號管中分別取 5 μL 和待測樣品一起進(jìn)行定量 PCR（見下步），每個樣品做 3 次重復(fù)。PCR 后得到每個陽性對照稀釋樣品的熒光 PCR Ct 值，并以之為縱軸，以濃度的對數(shù)值為橫軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
儲存條件：
僅用于科研14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細(xì)胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細(xì)胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復(fù)凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
產(chǎn)品名稱 | 石斛探針法PCR鑒定試劑盒價格 |
英文名稱 | Herba dendrobii |
貨號 | YSP9132 |
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PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
飽和苦味緩沖液?；愊惴?≥98%, FCC植酸鈉anti- NA14 antibody
anti- NAB2 antibody
肌氨酸氧化酶酸異龍腦酯 90%二酰亞胺anti- NADK antibody
anti- NAGA antibody
N-基酸酯鹽酸鹽位紫羅蘭酮 97%叔醇鉀anti- NAGK antibody
anti- NAGS antibody
N-基酸酯鹽酸鹽異基紫羅蘭酮70 60-70%耐曬紅BBSanti- NANOG antibody
anti- NANOS3 antibody
N-基甘氨酸酸異戊酯 93%永固橙RLanti- NANS antibody
anti- NAP1L1 antibody
皂苷酸異戊酯 mixture of isomers, ≥97%, FG金光紅NCanti- NAP1L4 antibody
anti- NAPB antibody
三氧化二釤苯酸異戊酯 97%顏料黃anti- NAPG antibody
anti- NAPRT1 antibody
柳酸2-基酸異酯 Kosher, ≥98%耐曬黃anti- NAPRT1 antibody
anti- Napsin A antibody
N-水楊酰苯胺茉莉凈油 耐曬黃Ganti- NARF antibody
anti- NARFL antibody
鄰羥基苯醛肟茉莉酮 98%耐曬深紅BBManti- NARFL-Specific antibody
anti- NARG1 antibody
石斛探針法PCR鑒定試劑盒價格HUM, 正常人主動脈平滑肌細(xì)胞E-Cad(Human E-Cadherin) ELISA Kit 人E鈣粘著蛋白/上皮性鈣黏附蛋白NOLIMITS 7000BP DNA FRAGMENT
HAVSMC, 人主動脈平滑肌細(xì)胞E-Cad ELISA Kit 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白NOLIMITS 10000BP DNA FRAGMENT
LX-2, 人肝星形細(xì)胞株EB-VCA IgM EB 病毒 IgM(間接法二步法)NOLIMITS 25BP DNA FRAGMENT
3T3-L1, 小鼠前脂肪細(xì)胞EB-VCA IgG EB 病毒 IgG(間接法二步法)NOLIMITS 17000BP DNA FRAGMENT
腫瘤細(xì)胞EBV(Human anti-Epstein-Barr virus antibody) ELISA Kit 人抗EB病毒抗體RiboRuler High Range RNA Ladder
MCF-7（MCF7）（ATCC來源）, 人癌細(xì)胞EBv IgM(Human epstein-barr virus IgM) ELISA Kit 人EB病毒IgMRiboRuler High Range RNA Ladder, ready-to-use
MDA-MB-231（ATCC來源）, 人癌細(xì)胞EBv IgG(Human epstein-barr virus IgG) ELISA Kit 人EB病毒IgGRiboRuler Low Range RNA Ladder
Raji，人Burkitt's淋巴瘤細(xì)胞EBv IgA(Human epstein-barr virus IgA) ELISA Kit 人EB病毒IgARiboRuler Low Range RNA Ladder, ready-to-use
Saos-2，人成骨肉瘤細(xì)胞EBMZ(Human epidermal basement membrane zone) ELISA Kit 人抗表皮細(xì)胞基底膜抗體M13/pUC sequencing primer (-20), 17-mer
Caco-2，人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞EAR3(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3)ELISA Kit 人嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵素家族成員3M13/pUC Reverse Sequencing Primer (-26), 17-mer
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
實時熒光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，Z后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。
主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
主要技術(shù)：引物設(shè)計、RNA提取、cDNA合成、qPCR
