參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:苦杏仁染料法PCR鑒定試劑盒規(guī)格
英文名稱:Semen armeniacae amarum
貨號(hào):YSP8725
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
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適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
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PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板。可直接用臨床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論。
鑭標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml in 10% HCl澳洲特級(jí)胎牛血清松油醇Mouse P11(Caspase 11) ELISA Kit
Mouse P14(Caspase 14) ELISA Kit
镥標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml無噬菌體低內(nèi)毒素優(yōu)等胎牛血清二醇Mouse P9(Caspase-9) ELISA Kit
Mouse CaSR(Calcium Sensing Receptor) ELISA Kit
镥標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml in 10%HCl無支原體優(yōu)級(jí)胎牛血清胎盤粉Mouse T(Calpastatin) ELISA Kit
Mouse CAV1(Caveolin 1) ELISA Kit
錳標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlLIPOFECTAMINE2000(脂質(zhì)體2000)癸二酸Mouse CBX3(Chromobox Homolog 3) ELISA Kit
Mouse CCKAR(Cholecystokinin A Receptor) ELISA Kit
鎂標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/mlLIPOFECTAMINE2000(脂質(zhì)體2000)甘油?;憠A (甘酸膽堿 GPC)Mouse CCND2(G1/S-specific cyclin-D2) ELISA Kit
Mouse CCRL1(Chemokine C-C-Motif Receptor Like Protein 1) ELISA Kit
汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml脂質(zhì)體3000 Invitrogen原裝 氟米松(雙氟美松)Mouse CD3(Cluster of differentiation 3) ELISA Kit
Mouse CD4(Cluster Of Differentiation 4) ELISA Kit
汞標(biāo)準(zhǔn)溶液 100ml/L,溶劑:3%硝酸脂質(zhì)體3000 Invitrogen原裝 鹽酸小檗胺Mouse CDK5(Cyclin Dependent Kinase 5) ELISA Kit
Mouse CDKN1B(Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 1B) ELISA Kit
汞標(biāo)準(zhǔn)溶液100μg/ml,基體:3%硝酸脂質(zhì)體2000/Lip2000芝麻酚Mouse CDKN2A(Cyclin Dependent Kinase Inhibitor 2A) ELISA Kit
Mouse CEA(Carcinoembryonic Antign) ELISA Kit
汞標(biāo)準(zhǔn)溶液10.0ng/g,基體: 0.4mol/L HCL,K+2.2mg/L,Na+23mg/L脂質(zhì)體2000/Lip2000米托坦Mouse CFB(Complement Factor B) ELISA Kit
Mouse CFD(Complement Factor D) ELISA Kit
鉬標(biāo)準(zhǔn)溶液 1000μg/ml原位細(xì)胞凋亡試劑盒 (原裝50T,分成10T)roche、分裝 原位細(xì)胞凋亡檢測(cè)試劑盒 tunel 原位細(xì)胞凋亡試劑盒普拉西坦Mouse CFH(Complement Factor H) ELISA Kit
Mouse CFL2(Cofilin 2, Muscle) ELISA Kit
苦杏仁染料法PCR鑒定試劑盒規(guī)格抗生素培養(yǎng)基 35 號(hào)Medium35阿克泰 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%DG-18瓊脂pVAC2-mcs
抗生素培養(yǎng)基 36 號(hào)Medium36Soybean-Casein Digest Agar Medium三唑醇 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.9%YM瓊脂pVITRO1-blasti-GFP/LacZ
抗生素培養(yǎng)基 39 號(hào)Medium39蟲酰肼 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%YM11瓊脂pVITRO1-blasti-GFP/SEAP
抗生素培養(yǎng)基 40 號(hào)Medium39三唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=4%OGY瓊脂pVITRO1-blasti-Lucia/SEAP
抗生素培養(yǎng)基 41 號(hào)Medium39三唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%WL營(yíng)養(yǎng)瓊脂pVITRO1-blasti-mcs
pH7.0 緩沖蛋白胨溶液Buffered sodium chloride-peptone solution pH 7.0氟菌唑 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%改良沙氏瓊脂培養(yǎng)基pVITRO1-hygro-GFP/LacZ
大豆酪蛋白消化肉湯Casein soya bean digest broth基立枯 分析標(biāo)準(zhǔn)品,98%沙氏BHI瓊脂pVITRO1-hygro-GFP/SEAP
大豆酪蛋白消化瓊脂Casein soya bean digest agar滅多威 分析標(biāo)準(zhǔn)品,99%改良亞硫酸鹽瓊脂pVITRO1-hygro-Lucia/SEAP
沙氏葡萄糖瓊脂Sabouraud-dextrose agar滅多威標(biāo)準(zhǔn)溶液 100μg/ml,u=3%,基體:酮MRS瓊脂pVITRO1-hygro-mcs
馬鈴薯葡萄糖瓊脂Potato dextrose agar滅多威標(biāo)準(zhǔn)溶液 10μg/ml,u=6%UBA培養(yǎng)基pVITRO1-neo-GFP/LacZ