適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測,如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:百部PCR鑒定試劑盒規(guī)格
英文名稱:Radix stemonae
貨號(hào):YSP8525
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
5-基-2-基吡啶 97% 沙拉沙星木槿提取物Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit
Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit
環(huán)氧氯烷 Standard for GC,≥99.6% (GC) 氯草定雞腳參提取物Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit
Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit
環(huán)氧氯烷 AR 苯并[e]芘兒茶提取物Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit
Human KLK1(Kallikrein-1) ELISA Kit
環(huán)氧氯烷 CP 3-氟-4-氰基苯酸酯粉防己提取物Human KLK5(Kallikrein-5) ELISA Kit
Human LN(Laminin) ELISA Kit
環(huán)氧氯烷 ≥99.5% (GC) 2,4,5-三基苯胺寄生提取物Human LEP(Leptin) ELISA Kit
Human Leptin R(Leptin receptor) ELISA Kit
環(huán)氧氯烷 分析標(biāo)準(zhǔn)品 嘧菌酯黃水茄提取物Human LIFR(Leukemia inhibitory factor receptor) ELISA Kit
Human LUM(Lumican) ELISA Kit
2,6-二基吡啶 98% 霉酚酸嗎啉酯豆瓣菜提取物Human MCP-1(Monocyte Chemotactic Protein 1) ELISA Kit
Human MDC(Macrophage Derived Chemokine) ELISA Kit
3,5-二基吡啶 98% 3,4,5-三氧基苯酸廣玉蘭提取物Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit
Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit
酰酸酯 99% 分散藍(lán) 35珍珠母提取物Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit
Human MIA(Melanoma Inhibitory Activity Protein 1) ELISA Kit
酰酸酯 CP,98% 酰嘧磺隆紅蘿卜提取物Human MK(Midkine) ELISA Kit
Human MIP-1α(Macrophage Inflammatory Protein 1 Alpha) ELISA Kit
百部PCR鑒定試劑盒規(guī)格aGT(Human angiotensinogen) ELISA Kit 人血管緊張素原射干苷 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98% 呋喃唑酮 98%Fusarium equiseti
aGT ELISA Kit 大鼠血管緊張素原鳶尾黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥98%呋喃西林 分析標(biāo)準(zhǔn)品Fusarium graminearum
AGPA/PCA(Human anti-gastric parietal cell antibody) ELISA Kit 人抗胃壁細(xì)胞抗體鳶尾黃素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,≥97% 呋喃西林 98%Fusarium moniliforme
Ag-NORs(Human Argyrophilic nucleolar organizer region proteins) ELISA Kit 人核仁形成區(qū)嗜銀蛋白辣椒素 分析標(biāo)準(zhǔn)品,>98%硫酸鋁,十八水 Ph. Eur., BP, 100-110%, 51.0-59.0% Al2(SO4)3 Fusarium nivale
a-Glu(Mouse Alpha-Glucosidase) ELISA Kit 小鼠α葡萄糖苷酶溴苯 CP,98.0%硫酸鋁 99.99% metals basisFusarium oxysporum
a-Glu ELISA Kit 大鼠α葡萄糖苷酶溴苯 99.5%赫斯特?zé)晒馊剂希?3258 98%Fusarium poae
AGEs(Mouse advanced glycation end products) ELISA Kit 小鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物溴苯 AR,99%赫斯特?zé)晒馊剂希?3342 98%Fusarium solani
AGEs ELISA Kit 大鼠晚期糖基化終末產(chǎn)物溴苯 Standard for GC,>99.5%(GC)胞內(nèi)鈣熒光探針BAPTA, AM 95%Fusarium sporotricoides
AGAA(Human anti-golgi apparatus antibody) ELISA Kit 人抗高爾基體抗體3-溴酸 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基熒光素 90%Fusarium spp.
AGA(Human anti-gliadin antibody) ELISA Kit 人抗麥膠蛋白/麥醇溶蛋白抗體1,8-二溴辛烷 98%2',7'-二-(2-羧基)-5(6)-羧基熒光素酰酯1 mg/ml,溶劑:DMSOFusarium tricinctum
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論