酸性蛋白酶檢測(cè)試劑盒微量法-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-01S63507

公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：酸性蛋白酶檢測(cè)試劑盒微量法

規(guī)格：100管/48樣

檢測(cè)方法：微量法

貨號(hào)：FS-01S63507
商品介紹：

測(cè)定意義

ACP是一種在酸性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解的酶。該酶主要用于酒精發(fā)酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。

測(cè)定原理：

酸性條件下，ACP催化酪蛋白水解產(chǎn)生氨酸；在堿性條件下，氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；鎢藍(lán)在680nm有特征吸收峰，通過測(cè)定其吸光度增加，來計(jì)算ACP活性。

自備儀器和樣品：

水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、0.5 mL EP管和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。
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粗酶液提?。?/span>

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

2、血清（漿）樣品：直接檢測(cè)。

操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量，如樣品濃度過高時(shí)，應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍，計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl（在使用前一小時(shí)內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測(cè)溶液B工作液（同檢測(cè)A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

綿羊CCAAT增強(qiáng)子結(jié)合蛋白γ(C/EBPγ)聯(lián)免疫試劑盒鮑姆木層孔Mouse HC II (Heparin Cofactor II) ELISA Kit

綿羊二肽基肽IV (DPP4)聯(lián)免疫試劑盒根霉Mouse HB-EGF (Heparin-binding Epidermal Growth Factor-like Growth Factor) ELISA Kit

綿羊Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)聯(lián)免疫試劑盒假單胞屬M(fèi)ouse LIPC (Lipase, Hepatic) ELISA Kit

綿羊甲狀腺球蛋白(TG)聯(lián)免疫試劑盒瓦尼針層孔Mouse HGF (Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit

綿羊Rho GDP解離抑制因子α(ARHGDIα)聯(lián)免疫試劑盒冷溫木拉克酵母Mouse HNF1a (Hepatocyte Nuclear Factor 1 Alpha) ELISA Kit

綿羊胃蛋白原C(PGC)聯(lián)免疫試劑盒放射形根瘤Mouse HNF1b (Hepatocyte Nuclear Factor 1 Beta) ELISA Kit

綿羊基質(zhì)衍生因子4(SDF-4)聯(lián)免疫試劑盒芬尼青霉Mouse HNF4a (Hepatocyte Nuclear Factor 4 Alpha) ELISA Kit

綿羊轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)聯(lián)免疫試劑盒棒曲霉Mouse HNF6a (Hepatocyte Nuclear Factor 6 Alpha) ELISA Kit

綿羊葡萄糖-6-磷脫氫(G6PD)聯(lián)免疫試劑盒雅致放射毛霉Mouse HNF6b (Hepatocyte Nuclear Factor 6 Beta) ELISA Kit

綿羊激肽釋放7(KLK7)聯(lián)免疫試劑盒大豆慢生根瘤Mouse HDGF (Hepatoma Derived Growth Factor)ELISA Kit

綿羊凝血受體(TR)聯(lián)免疫試劑盒枝孢霉Mouse Hepc (Hepcidin) ELISA Kit

綿羊Ras-GTP激活蛋白1(Ras-GAP1)聯(lián)免疫試劑盒貪噬屬M(fèi)ouse HNRPA1 (Heterogeneous Nuclear Ribonucleoprotein A1) ELISA Kit

綿羊趨化樣因子超家族成員7(CKLFSF7)聯(lián)免疫試劑盒卷枝毛霉Mouse HK1 (Hexokinase 1) ELISA Kit

綿羊B因子(BF)聯(lián)免疫試劑盒黃色短桿*Mouse HK (Hexokinase) ELISA Kit

綿羊核糖體蛋白S6激β1(RPS6Kβ1)聯(lián)免疫試劑盒解淀粉芽孢桿Mouse HMGB-1 (High mobility group protein B1) ELISA Kit
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