適用范圍【參考值】
1.試劑盒有效性判定:
(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線或Ct值≤35。
(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線形為直線或輕微斜線,無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。
2.標(biāo)本結(jié)果判定:
(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。
(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。
(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。
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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:白芷PCR鑒定試劑盒規(guī)格
英文名稱:Radix angelicae dahuricae
貨號(hào):YSP8537
產(chǎn)品規(guī)格:50次
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
產(chǎn)品保存:-20℃保存
產(chǎn)品有效期:一年
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實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μ
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)
三、注意事項(xiàng)
1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行。好設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
2.純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
氧化鈹 99.95% metals basis N-苯基氨基酸基醚穗花牡荊提取物Human APOC3(Apolipoprotein C-III) ELISA Kit
Human PDGFD(Plaet-derived growth factor D) ELISA Kit
氧化鈹 99% 3-溴-2,6-二氟苯密蒙花提取物Human GAS6(Growth arrest-specific protein 6) ELISA Kit
Human APOA4(Apolipoprotein A-IV) ELISA Kit
銦 99.9999% 2,3-二氟-6-氧基苯腈云芝提取物Human APOC2(Apolipoprotein C-II) ELISA Kit
Human APOB(Apolipoprotein B-100) ELISA Kit
氧化銦 99.99% metals basis 溴酰氯灰樹花多糖Human AGE(Advanced glycation end-product) ELISA Kit
Human IL7R(Interleukin-7 receptor) ELISA Kit
硫酸銦 無(wú)水,99.99% metals basis 6-氨基糖精香菇多糖Human TNNI1(Troponin I, slow skeletal muscle) ELISA Kit
Human LGALS1(Galectin-1) ELISA Kit
鈹粉 99%,50目 3-(4-氧苯基)-3-羰基酸酯黑木耳提取物Human FABP1(Fatty acid-binding protein, liver) ELISA Kit
Human IL-36G(Interleukin-36 gamma) ELISA Kit
氧化鈹 99% 1-芐基-4-哌啶醛蟲草提取物Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit
Human NPS(Neuropeptide S) ELISA Kit
酰溴 97% 2-溴-3-基苯酚蟲草提取物Human APOA2(Apolipoprotein A-II) ELISA Kit
Human CD276(CD276 antigen) ELISA Kit
溴酰溴 97% 間氯基苯酸叔酯猴頭菇提取物Human CTSL2(Cathepsin L2) ELISA Kit
Human TNFRSF8(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 8) ELISA Kit
2-溴酰溴 97% 己酸二氨基醇酯檸檬酸鹽猴頭菇提取物Human COR(Cortisol) ELISA Kit
Human CAT(Catalase) ELISA Kit
白芷PCR鑒定試劑盒規(guī)格AAV(Human adeno-associated virus) ELISA Kit 人腺相關(guān)病毒聚苯烯微球 diameter 8.0 - 8.9μm ,5% w/v 氯代三叔基磷化金(I) 97%Infectious Hypodermal and Hematopoietic Necrosis Virus(IHHNV)
AACT(Human Alpha1 Antichymotrypsin) ELISA Kit 人α1抗胰糜蛋白酶聚苯烯微球 diameter 9.0 – 9.9μm ,5% w/v 氯(三基膦)金 98%Infectious Laryngotracheitis Virus(ILTV)
AAA(Human anti-albumin antibody) ELISA Kit 人抗白蛋白抗體聚苯烯微球 diameter 9.0 – 9.9μm ,2.5% w/v (二基苯基膦)氯化金 97%Infectious Spleen and Kidney Necrosis Virus(ISKNV )
AAA(Human Anti-adrenocortical antibody) ELISA Kit 人抗腎上腺皮質(zhì)抗體氨基聚苯烯微球 diameter 0.05 - 0.1μm ,2.5% w/v(三苯基膦)氯化金(I) 98%Isospora spp.
AAA(Human anti-Actin antibody) ELISA Kit 人抗肌動(dòng)蛋白抗體氨基聚苯烯微球 diameter 0.2 - 0.5μm ,2.5% w/v氧基(環(huán)辛二烯)銥(I)二聚體 96%Isospora suis
AA(Human Arachidonic Acid) ELISA Kit 人花生四烯酸氨基聚苯烯微球 diameter 0.6 - 1.0μm,2.5% w/v(1,1'-雙(二苯基膦)二茂鐵)二氯化鎳 97%Israeli Acute Paralysis Virus
A Beta1-42(Mouse amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit 小鼠β淀粉樣蛋白1-42氨基聚苯烯微球 diameter 1.0 - 1.9μm,5% w/v 1,2-雙(二苯基膦)烷氯化鎳 98%Ixoides spp.
A Beta1-42(Human amyloid beta peptide 1-42) ELISA Kit 人β淀粉樣蛋白1-42氨基聚苯烯微球 diameter 2.0 - 2.9μm,5% w/v2-(二環(huán)己基膦基)聯(lián)苯 98%Kingella kingae
A Beta1-42 ELISA Kit 大鼠β淀粉樣蛋白1-42氨基聚苯烯微球 diameter 3.0 - 3.9μm,5% w/v 2-二環(huán)己膦基-2'-(N,N-二胺)-聯(lián)苯 98%Klebsiella aerogenes
A Beta1-40(Mouse amyloid beta peptide 1-40) ELISA Kit 小鼠β淀粉樣蛋白氨基聚苯烯微球 diameter 4.0 - 4.9μm,5% w/v 二叔基氯化膦 96%Klebsiella oxytoca
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結(jié)合是關(guān)鍵。引物與模板的結(jié)合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對(duì)原則的。聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應(yīng)中模板與引物的結(jié)合(復(fù)性)可以在較高的溫度下進(jìn)行,結(jié)合的特異性大大增加,被擴(kuò)增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過(guò)選擇特異性和保守性高的靶基因區(qū),其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產(chǎn)物的生成量是以指數(shù)方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級(jí)的起始待測(cè)模板擴(kuò)增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬(wàn)個(gè)細(xì)胞中檢出一個(gè)靶細(xì)胞;在病毒的檢測(cè)中,PCR的靈敏度可達(dá)3個(gè)RFU(空斑形成單位);在細(xì)菌學(xué)中小檢出率為3個(gè)細(xì)菌。
(3) 簡(jiǎn)便、快速
PCR反應(yīng)用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應(yīng)液加好后,即在DNA擴(kuò)增液和水浴鍋上進(jìn)行變性-退火-延伸反應(yīng),一般在2~4 小時(shí)完成擴(kuò)增反應(yīng)。擴(kuò)增產(chǎn)物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無(wú)放射性污染、易推廣。
(4) 對(duì)標(biāo)本的純度要求低
不需要分離病毒或細(xì)菌及培養(yǎng)細(xì)胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴(kuò)增模板??芍苯佑门R床標(biāo)本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發(fā)、細(xì)胞、活PCR技術(shù)概論